測量方法:
本法系用液相色譜法(通則0512)測定藥材、飲片及制劑中的毒素(以毒素B1進展情況、毒素B2銘記囑托、毒素G1堅定不移,毒素G2總量計)相結合,除另有規(guī)定外線上線下,按下列方法測定創新延展。
液相色譜儀器構成:
等度液相色譜儀(高壓輸液泵一臺規劃、熒光檢測器一臺、柱溫箱一臺完成的事情、進樣器1件物聯與互聯、色譜柱一根等)
柱后衍生儀:PCS-i220A/B
色譜柱:PC C18 4.6×150mm,5μm
高速離心機:離心速度4000轉/分鐘以上
溶劑過濾器
超聲波清洗器
固相萃取儀
免疫親和柱
分析天平:萬分之一
均質(zhì)器(高速攪拌器):攪拌速度大于11000轉/分鐘
試劑
甲醇:色譜純
乙腈:色譜純
0.05%的碘溶液
超純水
毒素B1.毒素B2改造層面、毒素G1供給、毒素G2對照品
色譜條件
檢測器:熒光檢測器
色譜柱:PC C18 4.6×150mm效高化,5μm
流動相:甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)
流速:1.0ml/min
柱溫:40℃
衍生溶液:0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加入甲醇100ml使溶解投入力度,用水稀釋至1000ml制成)
衍生化泵流速:0.2ml/min
衍生化溫度:70℃
激發(fā)波長λex=360nm(或365nm),發(fā)射波長λem=450nm
混合對照品溶液的制備
精密量取毒素混合標準品(毒素B1尤為突出、毒素B2規定、毒素G1、毒素G2標示濃度分別為1.0μg/ml空間載體、0.3μg/ml高質量、1.0μg/ml、0.3μg/m1)0.5ml重要組成部分,置10ml量瓶中流程,用甲醇稀釋至刻度,作為儲備液勃勃生機。精密量取儲備液1ml助力各業,置25ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度提供有力支撐,即得應用。
供試品溶液的制備
取供試品粉末約15g(過二號篩),精密稱定品率,加入氯化鈉3g相貫通,置于均質(zhì)瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml積極影響,高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11000轉/分鐘)自動化方案,離心5分鐘(離心速度4000轉/分鐘),精密量取上清液15ml越來越重要,置50ml量瓶中線上線下,用水稀釋至刻度,搖勻像一棵樹,用微孔濾膜(0.45μm)濾過過程中,量取續(xù)濾液20.0ml,通過免疫親合柱能運用,流速每分鐘3ml達到,用水20ml洗脫,洗脫液棄去不可缺少,使空氣進入柱子蓬勃發展,將水擠出柱子,再用適量甲醇洗脫積極回應,收集洗脫液重要性,置2ml量瓶中凝聚力量,并用甲醇稀釋至刻度,搖勻聽得進,即得新的力量。
測定方法
精密吸取上述混合對照品溶液20μl,注入液相色譜儀便利性,測定峰面積全面展示。另精密吸取上述供試品溶液20μl,注入液相色譜儀深刻認識,測定峰面積核心技術,計算出zui終結果。
毒素B1主動性、B2創造性、G1、G2對照品色譜圖:
以上是使用PCS-i220A/B柱后衍生儀 結果基線平穩(wěn) 峰型窄 檢出限低 檢測準確 *方法要求道路。