液相系統(tǒng)一般由高壓輸液泵首次、進(jìn)樣器競爭激烈、色譜柱、檢測器系統、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成非常重要。其中輸液泵、色譜柱空間廣闊、檢測器是關(guān)鍵部件營造一處。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)知識和技能、自動進(jìn)樣器取得顯著成效、預(yù)柱或保護(hù)柱、柱溫控制器等實現,現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)估算,進(jìn)行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型HPLC儀還備有自動餾分收集裝置的可能性。
一、高壓輸液泵
高壓輸液泵是HPLC系統(tǒng)中zui重要的部件之一服務為一體。泵的性能好壞直接影響到整個系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性問題。輸液泵應(yīng)具備如下性能:①流量穩(wěn)定,其RSD應(yīng)<0.5%全會精神,這對定性定量的準(zhǔn)確性至關(guān)重要系統穩定性;②流量范圍寬,分析型應(yīng)在范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào)集中展示,制備型應(yīng)能達(dá)到100ml/min實力增強;③輸出壓力高,一般應(yīng)能達(dá)到150~300kg/cm2探索創新;④液缸容積袔砣轮悄?。虎菝芊庑阅芎眯庐a品,耐腐蝕去完善。
泵的種類很多,按輸液性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵長遠所需;恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵求索、柱塞往復(fù)泵和隔膜往復(fù)泵。恒壓泵受柱阻影響規模,流量不穩(wěn)定穩定發展;螺旋泵缸體太大,這兩種泵已被淘汰提供深度撮合服務。目前應(yīng)用zui多的是柱塞往復(fù)泵服務品質。
柱塞往復(fù)泵的液缸容積小的發生,可至0.1ml,因此易于清洗和更換流動相表現明顯更佳,特別適合于再循環(huán)和梯度洗脫狀態;改變電機(jī)轉(zhuǎn)速能方便地調(diào)節(jié)流量,流量不受柱阻影響指導。其主要缺點是輸出的脈沖性較大廣泛認同,現(xiàn)多采用雙泵系統(tǒng)來克服。雙泵按連接方式可分為并聯(lián)式和串聯(lián)式流動性,一般說來并聯(lián)泵的流量重現(xiàn)性較好(RSD為0.1%左右鍛造,串聯(lián)泵為0.2~0.3%),但出故障的機(jī)會較多(因多一單向閥)持續創新,價格也較貴改善。
歐世盛是專業(yè)高壓輸液泵等精密儀器核心部件供應(yīng)商,我們的高壓輸液泵采用耐腐蝕的材質(zhì)協調機製,瑞士*單向閥信息化,美國原裝密封圈和壓力傳感器,使用壽命長實踐者,冷壓柱塞桿取得明顯成效,同軸度偏差zui小,特殊凸輪設(shè)計數據,減小壓力脈動創新的技術,多種電機(jī)規(guī)格可供選擇,電機(jī)等部件可選范圍廣顯著,流量精度高快速增長。進(jìn)口的品質(zhì),國產(chǎn)的價格占,受到各行業(yè)的*高質量!
二、進(jìn)樣器
早期使用隔膜和停流進(jìn)樣器激發創作,裝在色譜柱入口處≈鸩礁纳?,F(xiàn)在大都使用六通進(jìn)樣閥或自動進(jìn)樣器。進(jìn)樣裝置要求:密封性好提升,死體積小持續,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣再獲,進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力產品和服務、流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式可分為:隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣增多、閥進(jìn)樣活動上、自動進(jìn)樣。
【隔膜進(jìn)樣】
用微量注射器將樣品注入專門設(shè)計的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi)進一步推進,可把樣品直接送到柱頭填充床的中心導向作用,死體積幾乎等于零,可以獲得*的柱效應用的選擇,且價格便宜十大行動,操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPa以上)背景下;此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng)綜合措施,使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1~2%;加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到自然條件,常規(guī)分析使用受到限制設計標準。
【停流進(jìn)樣】
可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染互動互補,停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)“鬼峰”發揮重要帶動作用;另一缺點是保留時間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜>中意料之外,效果較好文化價值。
【閥進(jìn)樣】
一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥(以美國Rheodyne公司的7725和7725i型zui常見),其關(guān)鍵部件由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成系統。由于閥接頭和連接管死體積的存在,柱效率低于隔膜進(jìn)樣(約下降5~10%左右)進一步提升,但耐高壓(35~40MPa)空間廣闊,進(jìn)樣量準(zhǔn)確,重復(fù)性好(0.5%)改革創新,操作方便知識和技能。
【自動進(jìn)樣】
用于大量樣品的常規(guī)分析。
三新模式、色譜柱
色譜是一種分離分析手段更加廣闊,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟提高。對色譜柱的要求是柱效高可以使用、選擇性好,分析速度快等紮實。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相效高化、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)投入力度、多孔碳等創造,其粒度一般為3,5,7,10μm等不難發現,柱效理論值可達(dá)5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效設備製造;對于同系物分析發展需要,只要500即可;對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子管理,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要顯示。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達(dá)到*效率新型儲能,除柱外死體積要小外創新能力,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù)範圍,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的求得平衡,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流空間廣闊,流速較快至關重要,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬服務品質,這就是管壁效應(yīng)的發生。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中影響,柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)新的動力。
【柱的構(gòu)造】
色譜柱由柱管、壓帽發展契機、卡套(密封環(huán))廣泛關註、篩板(濾片)、接頭去突破、螺絲等組成能運用。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于時智能設備,也可采用厚壁玻璃或石英管不可缺少,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效特點,減小管壁效應(yīng)積極回應,不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度又進了一步,其效果與拋光相同平臺建設。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板使用,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金大幅拓展,孔徑0.2~20μm(5~10μm),取決于填料粒度更加堅強,目的是防止填料漏出與時俱進。
色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類,尺寸規(guī)格也不同:①常規(guī)分析柱(常量柱)初步建立,內(nèi)徑2~5mm(常用4.6mm綜合運用,國內(nèi)有4mm和5mm),柱長10~30cm的方法;②窄徑柱(又稱細(xì)管徑柱實事求是、半微柱semi-microcolumn),內(nèi)徑1~2mm落到實處,柱長10~20cm服務水平;③毛細(xì)管柱(又稱微柱microcolumn),內(nèi)徑0.2~0.5mm技術創新;④半制備柱處理方法,內(nèi)徑>5mm;⑤實驗室制備柱持續向好,內(nèi)徑20~40mm習慣,柱長10~30cm;⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米進展情況。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長建強保護、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應(yīng)生產效率。
【柱的發(fā)展方向】
因強(qiáng)調(diào)分析速度而發(fā)展出短柱使命責任,柱長3~10cm,填料粒徑2~3μm創新延展。為提高分析靈敏度強化意識,與質(zhì)譜(MS)聯(lián)接長期間,而發(fā)展出窄徑柱基本情況、毛細(xì)管柱和內(nèi)徑小于0.2mm的微徑柱(microbore)。細(xì)管徑柱的優(yōu)點是:①節(jié)省流動相高端化;②靈敏度增加力量;③樣品量少;④能使用長柱達(dá)到高分離度提單產;⑤容易控制柱溫深入實施;⑥易于實現(xiàn)LC-MS聯(lián)用。
但由于柱體積越來越小,柱外效應(yīng)的影響就更加顯著效果,需要更小池體積的檢測器(甚至采用柱上檢測)有所應,更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設(shè)備應(yīng)具備如下性能:輸液泵能精密輸出1~100μl/min的低流量合作關系,進(jìn)樣閥能準(zhǔn)確著力提升、重復(fù)地進(jìn)樣微小體積的樣品。且因上樣量小傳遞,要求高靈敏度的檢測器融合,電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點。
【柱的填充和性能評價】
色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外相關性,還與填充技術(shù)有關(guān)完成的事情。在正常條件下,填料粒度>20μm時穩定,干法填充制備柱較為合適改造層面;顆粒<20μm時,濕法填充較為理想效高化。填充方法一般有4種:①高壓勻漿法新體系,多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;②徑向加壓法創造,Waters>尤為突出;③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱環境;④干法空間載體。柱填充的技術(shù)性很強(qiáng),大多數(shù)實驗室使用已填充好的商品柱相對簡便。
必須指出重要組成部分,液相色譜柱的獲得,裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié)合作,但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣勃勃生機,以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理。
四極致用戶體驗、檢測器
檢測器是HPLC儀的三大關(guān)鍵部件之一提供有力支撐。其作用是把洗脫液中組分的量轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枴PLC的檢測器要求靈敏度高建議、噪音低(即對溫度品率、流量等外界變化不敏感)、線性范圍寬不斷發展、重復(fù)性好和適用范圍廣積極影響。
【分類】
按原理可分為光學(xué)檢測器(如紫外自動化方案、熒光、示差折光越來越重要、蒸發(fā)光散射)線上線下、熱學(xué)檢測器(如吸附熱)、電化學(xué)檢測器(如極譜醒悟、庫侖過程中、安培)、電學(xué)檢測器(電導(dǎo)能運用、介電常數(shù)達到、壓電石英頻率)、放射性檢測器(閃爍計數(shù)不可缺少、電子捕獲蓬勃發展、氦離子化)以及氫火焰離子化檢測器。
按測量性質(zhì)可分為通用型和專屬型(又稱選擇性)積極回應。通用型檢測器測量的是一般物質(zhì)均具有的性質(zhì)重要性,它對溶劑和溶質(zhì)組分均有反應(yīng),如示差折光有所提升、蒸發(fā)光散射檢測器聽得進。通用型的靈敏度一般比專屬型的低。專屬型檢測器只能檢測某些組分的某一性質(zhì)先進水平,如紫外便利性、熒光檢測器,它們只對有紫外吸收或熒光發(fā)射的組分有響應(yīng)重要平臺。
按檢測方式分為濃度型和質(zhì)量型深刻認識。濃度型檢測器的響應(yīng)與流動相中組分的濃度有關(guān),質(zhì)量型檢測器的響應(yīng)與單位時間內(nèi)通過檢測器的組分的量有關(guān)應用提升。
檢測器還可分為破壞樣品和不破壞樣品的兩種主動性。
【性能指標(biāo)】
噪音和漂移:在儀器穩(wěn)定之后,記錄基線1小時發展的關鍵,基線帶寬為噪音道路,基線在1小時內(nèi)的變化為漂移。它們反映檢測器電子元件的穩(wěn)定性真諦所在,及其受溫度和電源變化的影響指導,如果有流動相從色譜柱流入檢測器,那么它們還反映流速(泵的脈動)和溶劑(純度倍增效應、含有氣泡規則製定、固定相流失)的影響製造業。噪音和漂移都會影響測定的準(zhǔn)確度優化服務策略,應(yīng)盡量減小關規定。
靈敏度(sensitivity):表示一定量的樣品物質(zhì)通過檢測器時所給出的信號大小。對濃度型檢測器兩個角度入手,它表示單位濃度的樣品所產(chǎn)生的電信號的大小建強保護,單位為mV·ml/g。對質(zhì)量型檢測器生產效率,它表示在單位時間內(nèi)通過檢測器的單位質(zhì)量的樣品所產(chǎn)生的電信號的大小使命責任,單位為mV·s/g。
檢測限:檢測器靈敏度的高低使用,并不等于它檢測zui小樣品量或zui低樣品濃度能力的高低合規意識,因為在定義靈敏度時,沒有考慮噪聲的大小有效性,而檢測限與噪聲的大小是直接有關(guān)的創新內容。
檢測限是檢測器的一個主要性能指標(biāo),其數(shù)值越小創新科技,檢測器性能越好服務延伸。值得注意的是,分析方法的檢測限除了與檢測器的噪聲和靈敏度有關(guān)外具有重要意義,還與色譜條件進一步、色譜柱和泵的穩(wěn)定性及各種柱外因素引起的峰展寬有關(guān)。
線性范圍:指檢測器的響應(yīng)信號與組分量成直線關(guān)系的范圍強大的功能,即在固定靈敏度下實際需求,zui大與zui小進(jìn)樣量(濃度型檢測器為組分在流動相中的濃度)之比。也可用響應(yīng)信號的zui大與zui小的范圍表示優勢,例如
檢測器的線性范圍是-0.1~2.0A敢於監督。
線性范圍一般可通過實驗確定。我們希望檢測器的線性范圍盡可能大些結構,能同時測定主成分和痕量成分重要的作用。此外還要求池體積小,受溫度和流速的影響小規模最大,能適合梯度洗脫檢測等穩中求進。
池體積:除制備色譜外,大多數(shù)HPLC檢測器的池體積都小于10μl最深厚的底氣。在使用細(xì)管徑柱時協同控製,池體積應(yīng)減少到1~2μl甚至更低,不然檢測系統(tǒng)帶來的峰擴(kuò)張問題就會很嚴(yán)重品質。而且這時池體利用好、檢測器與色譜柱的連接、接頭等都要精心設(shè)計解決問題,否則會嚴(yán)重影響柱效和靈敏度系列。
五作用、數(shù)據(jù)處理和計算機(jī)控制系統(tǒng)
早期的HPLC儀器是用記錄儀記錄檢測信號,再手工測量計算慢體驗。其后著力增加,使用積分儀計算并打印出峰高、峰面積和保留時間等參數(shù)科技實力。80年代后處理,計算機(jī)技術(shù)的廣泛應(yīng)用使HPLC操作更加快速、簡便重要的、準(zhǔn)確開展研究、精密和自動化,現(xiàn)在已可在互聯(lián)網(wǎng)上遠(yuǎn)程處理數(shù)據(jù)相互融合。計算機(jī)的用途包括三個方面:①采集質生產力、處理和分析數(shù)據(jù);②控制儀器技術交流;③色譜系統(tǒng)優(yōu)化和專家系統(tǒng)先進的解決方案。
六、恒溫裝置
在HPLC儀中色譜柱及某些檢測器都要求能準(zhǔn)確地控制工作環(huán)境溫度創造更多,柱子的恒溫精度要求在±0.1~0.5℃之間宣講活動,檢測器的恒溫要求則更高。
溫度對溶劑的溶解能力工藝技術、色譜柱的性能效率、流動相的粘度都有影響。一般來說近年來,溫度升高講道理,可提高溶質(zhì)在流動相中的溶解度,從而降低其分配系數(shù)K技術先進,但對分離選擇性影響不大更多的合作機會;還可使流動相的粘度降低,從而改善傳質(zhì)過程并降低柱壓認為。但溫度太高易使流動相產(chǎn)生氣泡服務好。
色譜柱的不同工作溫度對保留時間、相對保留時間都有影響反應能力。在凝膠色譜中使用軟填料時溫度會引起填料結(jié)構(gòu)的變化共謀發展,對分離有影響;但如使用硬質(zhì)填料則影響不大結構重塑。
總的說來聽得懂,在液固吸附色譜法和化學(xué)鍵合相色譜法中,溫度對分離的影響并不顯著高質量發展,通常實驗在室溫下進(jìn)行操作全方位。在液固色譜中有時將極性物質(zhì)(如緩沖劑)加入流動相中以調(diào)節(jié)其分配系數(shù)高效節能,這時溫度對保留值的影響很大。
不同的檢測器對溫度的敏感度不一樣深刻認識。紫外檢測器一般在溫度波動超過±0.5℃時,就會造成基線漂移起伏順滑地配合。示差折光檢測器的靈敏度和zui小檢出量常取決于溫度控制精度深入,因此需控制在±0.001℃左右,微吸附熱檢測器也要求在±0.001℃以內(nèi)前沿技術。